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TP : Mise en évidence du rôle des enzymes dans la digestion des aliments D’après Patalano Lorsque nous mangeons, nous ingérons divers aliments : du pain, du lait, du poisson ou de la viande. Ces aliments se limitent à trois grands types de macromolécules (=grosse molécule) : lipides, protéines et glucides. La digestion des glucides comme l’amidon conduit à un nutriment : le glucose. Cette digestion se produit sous l’action des sucs digestifs produits par le pancréas. Ces sucs digestifs contiennent des enzymes comme l’amylase qui transforme l’amidon en glucose lors d’une réaction d’hydrolyse. On dit que l’amylase est un « catalyseur biologique ». On se propose de définir cette expression. En effet, l’hydrolyse de l’amidon peut se faire sans amylase, spontanément ou avec l’aide d’acide chlorhydrique, Hcl, présent dans notre estomac : alors pourquoi notre corps dépense-t-il de l’énergie à fabriquer une enzyme pour réaliser une réaction chimique qui peut se faire sans enzyme ? Hydrolyse A ![]() ![]() ![]() Afin de suivre le déroulement de la réaction d’hydrolyse, 2 tests d’identification de glucides sont utilisés : - La coloration au Lugol (ou eau iodée) qui permet de caractériser la présence d’amidon si la coloration est bleu nuit, si non la coloration est jaune (faites les tests avant de commencer le TP) - La réaction à la liqueur de Fehling qui permet de mettre en évidence la présence de glucose : la coloration est bleu en absence de glucose et précipité rouge brique se forme s’il y en a. La réaction a lieu à chaud (bain marie à 100°C) et en milieu basique. Un tableau (annexe 1) vous permet de consigner vos observations et interprétations; vous le remplirez puis l’imprimerez à la fin de l’heure. Certains seront relevés. Bon courage ! 1- Etude de l’hydrolyse spontanée de l’amidon : Un Erlenmeyer contenant de l’empois d’amidon (c’est à dire de l’amidon !) est laissé plusieurs jours a température ambiante. Un second contient de l’empois d’amidon frais venant d’être préparé. Nous allons voir si l’hydrolyse s’est produite : 1-A l’aide d’une pipette graduées, prélevez 5ml d’empois d’amidon dans chacun des Erlenmeyers (changez de pipette) puis déposez les dans deux tubes à essai : les tubes 1 et 2 (utilisez un stylo pour noter les tubes) 2-Prélevez 0,5 ml de chaque tube et déposez dans un puit de plaque de titration que vous aurez pris soin d’annoter avec le feutre. 3-Versez quelques gouttes de Lugol dans chacun des puits ; notez la coloration (+ positif ; - Négatif ; +/- nuancée) dans le tableau. 4-Prélevez 2 ml de liqueur de Fehling que vous mettrez dans chaque tube. 5-Placez les deux tubes 5 minutes au bain marie à 80°C puis notez la coloration. 6-Remplissez la partie observation/interprétation. 2- Etude de l’hydrolyse acide de l’amidon : L’acide utilisé est de l’acide chlorhydrique ; vous connaissez les dangers de sa manipulation ! Prudence. 1-Préparez les tubes à essai 3 et 4 comme indiqué dans le tableau. 2-Placez les tubes au bain marie à 80°C et déclenchez le chronomètre (ou votre montre) 3-Réalisez des prélèvements dans le tube 4 toutes les 10 minutes de t = 0 à t = 40 min. Testez chaque prélèvement au Lugol ; le test à la liqueur de Fehling ne se fera qu’au bout de 40 minutes (voir question 5) 4-Testez le tube 3 au bout de 40 minutes au Lugol et à la liqueur de Fehling. 5-Test du tube 4 : au bout de 40 minutes neutralisez le contenu du tube en ajoutant 2 ml de soude (NaOH) ; vérifiez le pH avec le papier pH et ajustez la dose de soude si besoin. ; réalisez enfin le test à la liqueur de Fehling. 6-Consignez vos résultats dans le tableau et interprétez-les. 3- Etude de l’hydrolyse enzymatique de l’amidon : 1-Préparez les tubes 5 et 6 en mettant 5 ml d’empois d’amidon frais à 37° C ( au bain marie que l’on testera à t = 20 ; le tubes 6 comportera en plus 0,5 ml d’amylase, l’enzyme de notre système digestif. 2- Au bout de 20 minutes testez les tubes à la liqueur de Fehling et au Lugol comme précédemment. 3- Consignez vos observations ; analysez le tableau, tirez une conclusion permettant de répondre à la question posée plus haut : « L’hydrolyse de l’amidon peut se faire sans l’enzyme « amylase », spontanément ou avec l’aide d’acide chlorhydrique, Hcl, présent dans notre estomac : alors pourquoi notre corps dépense-t-il de l’énergie à fabriquer une enzyme pour réaliser une réaction chimique qui peut se faire sans enzyme ? » |
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